精品无人区一区二区三区,一次灌浆与二次灌浆,军人全身脱精光自慰,香港三级午夜理伦三级三

客戶咨詢熱線:
Technical articles技術文章
首頁 > 技術文章 >【ISCO】反相RediSep®柱在肽分離中的應用與優(yōu)化

【ISCO】反相RediSep®柱在肽分離中的應用與優(yōu)化

 更新時間:2024-11-19 點擊量:215

一、應用概述

肽可以被定義為氨基酸的短鏈聚合物。單個肽的特性當然取決于其特定的氨基酸組成和排列方式。肽具有相對的極性,其結合特性與其他蛋白質(zhì)相當一致。

肽混合物可以被分離成單個肽種類。如果可以將這些單獨且更具體的肽包含在一個單一的餾分中,這將極大地加速許多科學過程。

以下是一個通用的方法,用于在可重復使用的反相RediSep® C18柱上將肽混合物分離成餾分。

通常最好從4.3克的RediSep反相柱開始。在探索特定肽的良好參數(shù)時,會使用較少的肽樣品和溶劑。一旦確定了洗脫參數(shù),就可以根據(jù)需要擴大過程規(guī)模?;仡櫡聪嗬碚摰膽谜f明AN10可能是有益的。

對于本參考文獻中使用的特定肽混合物,參數(shù)列于表1中。參數(shù)將隨肽結構而變化。


表格1:通用方法參數(shù)

【ISCO】反相RediSep®柱在肽分離中的應用與優(yōu)化


二、通用方法波長

理想的波長會根據(jù)肽的結構而變化。選擇具有最高靈敏度的波長是理想的,同時避免引入過多噪聲或遺漏某些化合物。如果210 nm過于嘈雜,那么214 nm通常會提供一個更干凈的基線。環(huán)狀結構在280 nm處吸收最好,雙鍵在254 nm處,單鍵在210 nm處。推薦的通用波長對于蛋白質(zhì)和肽是210 nm


反離子

為了提高肽和柱的性能,通常使用反離子。這有助于提供更均勻的分離,從而改善柱性能。常用的反離子是0.1%(體積比)三氟乙酉夋(TFA)。將其等量添加到AB移動相中。在整個分離過程中保持穩(wěn)定離子濃度會得到更一致的基線。簡單的配制方法是每升移動相中加入1毫升(0.1% v/v)。直接用移液管將TFA加入到移動相中并彳切底混合。


柱負載

這個參數(shù)根據(jù)肽的組成有很大的變化。對于4.3克的RediSep反相柱,0.5毫克應該是一個好的起點。


柱構造

柱本身由三個主要部分組成:

1. 支持介質(zhì)是固定相所綁定的固體表面。

2. 固定相是附著在支持介質(zhì)上的活性涂層,即C18。

3. 移動相是流過支持介質(zhì)的流體,以便將肽的活性部分暴露給固定相。


移動相或溶劑系統(tǒng)

許多肽強烈地吸附在C18上,通常需要一個強梯度來洗脫。典型地,水用作溶劑A,乙腈用作溶劑B來洗脫肽。


梯度

在建立新方法時,通常建議創(chuàng)建一個從095% B溶劑的非常緩慢的梯度,以確保所有峰都被洗脫并且柱子被清潔。

在初始的0-95%梯度運行后,洗脫輪廓大致確定,可以根據(jù)特定肽的需要修改梯度。通過在特定的保留時間改變梯度的斜率,可以優(yōu)化分離時間和峰形。


三、分析結果

1提供了一個參考肽的色譜圖。特定的肽是使用表1中列出的參數(shù)進行分離的。參數(shù)將隨著肽的結構而變化。


【ISCO】反相RediSep®柱在肽分離中的應用與優(yōu)化

1:樣品肽色譜圖


四、總結

肽的純化方法可以先在較小的柱上建立,然后根據(jù)所需的樣品負載量進行放大。

天干天干天啪啪夜爽爽av| 边吃奶边摸叫床刺激a片| 免费在线观看成人电影| 性生交大片免费看| 97高清视频在线观看免费| 少妇特黄a一区二区三区| 故意穿暴露被强好爽h漫画| 亚洲精品午夜国产va久久成人| 高h之交换小敏系列| 他强把手指伸进我的下面| 777奇米影视| 国自产拍偷拍精品啪啪一区二区| 亚洲欧美激情精品一区二区| 国产又黄又大又粗视频| 丰满人妻中伦妇伦精品app| 精品无人区无码乱码毛片国产| 穿成小奶娃各种做肉高h| 日韩人妻精品一区二区三区视频| 浴室人妻的情欲hd三级| 成人综合伊人五月婷久久| 亚洲av无码成人精品区日韩| 息与子五十路孕中文字幕| 99久久精品日本一区二区免费| 99久久精品国产| 国产精品一区二区在线观看| 亲嘴伸进内衣揉胸口激烈视频| 免费看真人直播| 侯府荡女h叶凝欢h| 欧美free性xxxx护士hd| 国产精品美女www爽爽爽视频| wwxx在线观看免费| 婚纱跪趴承受粗大撞击| 国产精品偷窥熟女精品视频| 精人妻无码一区二区三区| 中文字幕无码av波多野吉衣| 被主人在厨房用黄瓜调教| 图片 小说 校园 激情 都市| 国产一二三精品无码不卡日本| 日本少妇bbw丰满做爰图片| 武则天肉体大战野史dvd| 久久人妻无码精品一区二区三区|